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BD Matrigel™ 基底膜マトリックス



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技術情報

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関連製品

BD Matrigel™ ヒトES細胞用

 

BD BioCoat™ マトリゲル™マトリックス コート製品

基底膜の3次元モデルで多様な細胞、特に上皮、内皮、筋、および神経細胞の分化を促進

BD™ ディスパーゼ
BD™ セルリカバリーソリューション

マトリゲルからの細胞回収には、ディスパーゼとセルリカバリーソリューションの2種類をご用意しております。

BD BioCoat™ マトリゲルインベージョンチャンバー

in vitroにおける腫瘍細胞の浸潤能を迅速かつ再現性良くアッセイできます。

BD BioCoat™ 癌細胞浸潤アッセイシステム

・サンプル処理数を高めた簡便で再現性あるアッセイです。
・24と96マルチウェルプレートタイプが揃っています。

BD BioCoat™ アンジオジェネシス：血管内皮細胞浸潤アッセイシステム

簡便で、再現性のある方法で蛍光測定を使用して血管内皮細胞の浸潤を解析

BD BioCoat™ アンジオジェネシス：血管内皮細胞遊走アッセイシステム

定量的、再現性のあるin vitroモデルで、血管内皮細胞遊走を用いて候補化合物の効果を検討

BD BioCoat™ アンジオジェネシス：血管内皮細胞チューブ形成アッセイシステム

抗血管形成物質のスクリーニングに最適化されたシステムを使うことにより、面倒な作業に時間を取られることなく、また、再現性も向上



基底膜とは、in vivoで細胞層の下に存在する薄い膜状の細胞外マトリックスのことです。BDマトリゲル基底膜マトリックスは細胞外マトリックスタンパク質を豊富に含むEngelbreth-Holm-Swarm(EHS)マウス肉腫から抽出した可溶性基底膜調製品です。主成分は、ラミニン、コラーゲンIV、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、およびエンタクチン/ニドジェン1,2です。これにはTGF-β、上皮細胞増殖因子、インシュリン様成長因子、線維芽細胞増殖因子、組織プラスミノーゲン活性化因子3,4、EHS腫瘍に自然に産生される他の増殖因子も含みます。BDマトリゲルは、正常、または形質転換した足場依存性類上皮細胞や他の細胞の接着や分化に効果的です。これらには、神経5,6、肝細胞7、セルトリ細胞8,9、ヒヨコ水晶体10と血管内皮細胞11が含まれます。BD マトリゲルは、成獣ラットの肝細胞培養12,13、マウスにおける3次元培養14-17、ヒトの上皮細胞培養18,19で、遺伝子発現に影響を与えます。また、いくつもの種類の癌細胞浸潤の基礎実験20,21、in vivoにおける末梢神経の再生22-24のサポート、in vitro25,26とin vivo27-29における血管新生の研究に必要な基質を提供します。BD マトリゲルは、免疫不全マウスのin vivoでのヒト腫瘍細胞の増殖30-32をサポートします。



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カタログ番号 製品名 容量 価格
356234 BDマトリゲル 基底膜マトリックス 5 mL 24,800
354234 BDマトリゲル 基底膜マトリックス 10 mL 39,300
356237 BDマトリゲル フェノールレッドフリー 10 mL 41,600
356230 BDマトリゲル グロースファクターリデュースト（GFR） 5 mL 25,700
354230 BDマトリゲル グロースファクターリデュースト（GFR） 10 mL 44,100
356231 BDマトリゲル グロースファクターリデュースト フェノールレッドフリー 10 mL 46,200
354248 BD高濃度マトリゲル マトリックス 10 mL 63,000
354263 BD高濃度マトリゲル グロースファクターリデュースト 10 mL 72,400
354262 BD高濃度マトリゲル フェノールレッドフリー 10 mL 72,400
354277 BD マトリゲル ヒトES細胞用 5 mL 36,700

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特長



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豊富な選択の幅

  • BDマトリゲル グロースファクター リデュースト(GFR)は、さらに実験条件を限定した用途に適しています。通常のGFRタイプ、高濃度とフェノールレッドフリーのタイプがあります。
  • BD高濃度マトリゲルマトリックスは、in vivoでのアプリケーションに適しており、腫瘍の増殖をサポートします。また、プラグアッセイにおいてマウス皮下に注入後、その形状を保ちやすくなります。通常タイプ、グロースファクターリデューストとフェノールレッドフリーのタイプがあります。
  • BDマトリゲル フェノールレッドフリーは、色の検出(蛍光色素)などが必要なアッセイに適しています。
  • BDマトリゲル　ヒトES細胞用は、StemCell Technologies社が、ヒト胚性幹細胞（hES細胞）研究に重要な再現性と安定性を提供するためにmTeSR™1との培養に最適であることを確認したマトリゲルです。こちらを使用することで、スクリーニングに必要な時間を削減できます。
    mTeSR™1培地とBDマトリゲルの組み合わせは、いくつかのWiCell™ hESセルラインのフィーダーフリー培養において20継代まで成功しています。



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アプリケーション

細胞の増殖と分化
BDマトリゲルは、特に上皮細胞のような極性のある細胞の培養に適しています。また、肝細胞、哺乳類の上皮細胞、内皮細胞、平滑筋細胞と神経細胞を含む様々なタイプの細胞の分化を促進します。

写真はマトリゲル上で72時間培養した腺房をHE染色像。間接的免疫蛍光染色法により、HSG細胞腺房中の唾液腺に特異的なシステインタンパク質分解酵素抑制剤、シスタチンがあることが明らかになりました（データは示されていません）。（写真提供はHynda Kleinman博士）

新アプリケーションノート
BDマトリゲル™ マトリックスを用いたMDCK細胞の３次元培養と蛍光免疫染色法
BD マトリゲル™ を用いたNanoCulture® Plate上でのスフェロイド形成法
NanoCulture® Plateは、SCIVAX株式会社の取り扱いとなります。


代謝/毒性試験
BDマトリゲルは、薬物毒性試験における肝細胞のin vitroモデルとして有用です。

写真はBDマトリゲル上で培養した肝細胞の球状細胞クラスター像

肝細胞分化エンバイロメント
TB476（マトリゲルを用いた肝細胞のオーバーレイカルチャー）


浸潤アッセイ
BDマトリゲルは、in vitroの浸潤アッセイにおける生物学的な基底膜モデルを提供します。

写真は2個のヒト線維肉腫細胞の走査電子顕微鏡像。細胞は、メンブレンの孔を覆っているマトリゲルを消化し、PETメンブレンの8μmのポアを通り移動します。

BD BioCoat™ マトリゲル™ インベージョンチャンバー
BD BioCoat™ フルオロブロックガン細胞浸潤アッセイシステム


In VitroとIn Vivoにおける血管新生アッセイ
BDマトリゲルは、in vitroにおける内皮細胞の浸潤とチューブ形成アッセイの基質として働きます。また、BDマトリゲルプラグアッセイを用いることで異なる血管新生活性をin vivoで評価する事もできます。

BD BioCoat アンジオジェネシス：血管内皮細胞浸潤アッセイシステム
BD BioCoat アンジオジェネシス：血管内皮細胞遊走アッセイシステム
BD BioCoatアンジオジェネシス：血管内皮細胞チューブ形成アッセイシステム



免疫不全マウスでのin vivoにおける血管新生研究と腫瘍細胞の増殖
BDマトリゲルは、in vivoでのアプリケーションに適しており、腫瘍細胞の増殖をサポートします。また、プラグアッセイにおいてマウス皮下に注入後、その形状を保ちやすくなります。このことにより、注入した癌細胞や血管新生化合物をその場にとどめるので、in situ解析や将来的な摘出に適しています。通常のグロースファクターリデュースト（GFR）とフェノールレッドフリータイプがあります。

BDマトリゲル™ マトリックスを用いたin vivo / ex vivo血管新生定量法
マウスへのマトリゲル移植と組織の固定方法



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構成成分

BDマトリゲルとGFRマトリゲルの細胞外基質組成

マトリゲル成分 マトリゲルにおける組成比率 GFRマトリゲルにおける組成比率
ラミニン 56％ 61％
コラーゲンIV 31％ 30％
エンタクチン 8％ 7％

BDマトリゲルとGFRマトリゲルにある増殖因子(GF)の平均量
  BDマトリゲル GFRマトリゲル
bFGF(pg/ml) 0-0.1 0-0.1
EGF(ng/ml) 0.5-1.3 < 0.5
IGF-1(ng/ml) 15.6 5
PDGF(pg/ml) 12 < 5
NGF(ng/ml) < 0.2 < 0.2
TGF-beta(ng/ml) 2.3 1.7
% protein that gels 80 83



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品質管理

  • マウスコロニーは定期的にMouse Antibody Production(MAP)テストを用いて病原体の陰性確認
  • BDマトリゲル製造中に原料を厳重管理するために何種類もの病原体をPCRで陰性確認
  • 細菌、真菌、マイコプラズマについて陰性を確認
  • ローリー法によってタンパク濃度を測定
  • リムルス試験(Limulus Amoebocyte Lysate assay)によってエンドトキシン濃度を測定
  • 37℃で14日間、BD マトリゲルの安定性を確認
  • 各ロットの生物学的活性を神経突起伸張アッセイで確認。ヒヨコ後根神経節細胞を1.0mmのマトリゲルがコートされたプレートに播種し、NGFを加えることなく48時間培養。神経突起伸張のポジティブ反応を確認。



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参考文献

Introduction

1. Kleinman, H.K., et al., Isolation and characterization of type IV procollagen, laminin, and heparan sulfate proteoglycan from the EHS sarcoma, Biochemistry, 21(24):6188 (1982).
2. Kleinman, H.K., et al., Basement membrane complexes with biological activity, Biochemistry, 25(2):312 (1986).
3. Vukicevic, S., et al., Identification of multiple active growth factors in basement membrane Matrigel suggests caution in interpretation of cellular activity related to extracellular matrix components, Experimental Cell Research, 202(1):1 (1992).
4. McGuire, P.G. and Seeds, N.W., The interaction of plasminogen activator with a reconstituted basement membrane matrix and extracellular macromolecules produced by cultured epithelial cells, J. Cell. Biochem., 40(2):215 (1989).
Cell Growth and Differentiation
5. Biederer, T. and Scheiffele, P., Mixed-culture assays for analyzing neuronal synapse formation, Nature Protocols, 2(3):670 (2007).
6. Li, Y., et al., Essential role of TRPC channels in the guidance of nerve growth cones by brain-derived neurotrophic factor, Nature, 434(7035):894 (2005).
7. Hadley, M.A., et al., Extracellular matrix regulates Sertoli cell differentiation, testicular cord formation, and germ cell development in vitro, J. Cell Biol., 101(4):1511 (1985).
8. Ireland, M.E., et al., Quantification and regulation of mRNAs encoding beaded filament proteins in the chick lens, Curr Eye Res., 16(8):838 (1997).
9. McGuire, P.G., and Orkin, R.W., A simple procedure to culture and passage endothelial cells from large vessels of small animals, Biotechniques, 5(6):546 (1987).
10. Bissel, D.M., et al., Support of cultured hepatocytes by a laminin-rich gel. Evidence for a functionally significant subendothelial matrix in normal rat liver, J. Clinical Invest., 79(3):801 (1987).
11. Page, J.L., et al., Gene expression profiling of extracellular matrix as an effector of human hepatocyte phenotype in primary cell culture, Toxicological Sciences, 97(2):384 (2007).
12. Li, M.L., et al., Influence of a reconstituted basement membrane and its components on casein gene expression and secretion in mouse mammary epithelial cells, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84(1):136 (1987).
13. Barcellos-Hoff, M.H., et al., Functional differentiation and alveolar morphogenesis of primary mammary cultures on reconstituted basement membrane, Development, 105(2):223 (1989).
14. Roskelley, C.D., et al., Extracellular matrix-dependent tissue-specific gene expression in mammary epithelial cells requires both physical and biochemical signal transduction, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91(26):12378 (1994).
15. Xu, R., et al., Extracellular matrix-regulated gene expression requires cooperation of SWI/SNF and transcription factors, J. Biol. Chem., 282(20):14992 (2007).
16. Debnath, J., et al., Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures, Methods, 30(3):256 (2003).
17. Muthuswamy, S.K., et al., ErbB2, but not ErbB1, reinitiates proliferation and induces luminal repopulation in epithelial acini, Nat. Cell Biol., 3(9):785 (2001).
18. Madison, R., et al., Increased rate of peripheral nerve regeneration using bioresorbable nerve guides and a laminin-containing gel, Exp. Neurology, 88(3):767 (1985).
19. Xu, X.M., et al., Axonal regeneration into Schwann cell-seeded guidance channels grafted into transected adult rat spinal cord, J. Comp. Neurol., 351(1):145 (1995).
20. Fouad, K., et al., Combining schwann cell bridges and olfactory-ensheathing glia grafts with chondroitinase promotes locomotor recovery after complete transection of the spinal cord, The Journal of Neuroscience, 25(5):1169 (2005).
Metabolism/Toxicology Studies
21. Bi, Y., et al., Use of cryopreserved human hepatocytes in sandwich culture to measure hepatobiliary transport, Drug Metab Dispos., 34(9):1658 (2006).
22. Yu, X., et al., Essential role of extracellular matrix (ECM) overlay in establishing the functional integrity of primary neonatal rat sertoli cell/gonocyte co-cultures: an improved in vitro model for assessment of male reproductive toxicity, Toxicological Sciences, 84(2):378 (2005).
Invasion Assays
23. Terranova, V.P., et al., Use of a reconstituted basement membrane to measure cell invasiveness and select for highly invasive tumor cells, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83(2):465 (1986).
24. Albini, A., et al., A rapid in vitro assay for quantitating the invasive potential of tumor cells, Cancer Research, 47(12):3239 (1987).
In Vitro Angiogenesis Assay
25. Kubota, Y., et al., Role of laminin and basement membrane in the morphological differentiation of human endothelial cells into capillary-like structures, J. Cell Biol., 107(4):1589 (1988).
26. Maeshima, Y., et al., Identification of the anti-angiogenic site within vascular basement membrane-derived tumstatin, J. Biol. Chem., 276(18):15240 (2001).
In Vivo Angiogenesis Assays and Augmentation of Tumors in Immunosuppressed Mice
27. Passaniti, A., et al., A simple, quantitative method for assessing angiogenesis and antiangiogenic agents using reconstituted basement membrane, heparin, and fibroblast growth factor, Lab Invest., 67(4):519 (1992).
28. Isaji, M., et al., Tranilast inhibits the proliferation, chemotaxis and tube formation of human microvascular endothelial cells in vitro and angiogenesis in vivo, British Journal of Pharmacology, 122(6):1061 (1997).
29. Kisucka, J., et al., Platelets and platelet adhesion support angiogenesis while preventing excessive hemorrhage, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103(4):855 (2006).
30. Albini, A., et al., Matrigel promotes retinoblastoma cell growth in vitro and in vivo, Int. J. Cancer, 52(2):234 (1992).
31. Yue, W., et al., MCF-7 human breast carcinomas in nude mice as a model for evaluating aromatase inhibitors, J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 44(4-6):671 (1993).
32. Angelucci, A., et al., Suppression of EGF-R signaling reduces the incidence of prostate cancer metastasis in nude mice, Endocrine-Related Cancer, 13(1):197 (2006).



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