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Intracelluar Cytokine Staining Starter Kit

個々の細胞レベルでのサイトカイン産生状況を解析する手法については、これまで様々な改良と模索が行われて来ました。
個々のサイトカイン産生細胞の解析手法である、Immunohistochemistry、Immnocytochemistry、ELISPOT、In -situ hybridaization、ELISAなどはそれぞれ特徴と利点を持っていますが、手技の習熟を必要としたり、測定や解析に時間がかかりすぎてしまいます。

一方、フローサイトメーターによる細胞内サイトカインの測定は、個々の細胞レベルにおいて、その細胞の大きさ、顆粒度はもとより蛍光標識された抗体によって細胞表面及び細胞内抗原の発現状況など、同時に数種類のパラメーターをスピーディーに解析することを可能とする非常に有用な解析手法です。

フローサイトメーターを用いた細胞内サイトカイン測定では、細胞内のゴルジ体にあるサイトカインを細胞に固定、細胞膜透過処理の上、蛍光標識抗サイトカイン抗体で染色して測定します。通常の細胞表面抗原のフローサイトメーター測定と比較して、細胞の前処理、染色ステップなどが異なります。

BD Biosciences Pharmingen™ Intracellular Cytokine Staining Stater Kit はフローサイトメーターによる細胞内サイトカイン測定をはじめるために必要な試薬(抗体、バッファー、コントロール、詳細なプロトコール)が全て含まれています。Kit に含まれる染色に必要な試薬は既に適性濃度に調製済みです。


Human Intracelluar Cytokine Staining Starter Kit

Cat.No Description SIZE 希望
小売価格
劇/毒 データ
シート
MSDS
559302 Human Intracellular Cytokine Staining Stater Kit 25 tests \110,000 劇物 pdf pdf

キットの内容

1. Leukocyte Activation Cocktail ・・・2 vials, 各 100 μL

細胞刺激に用いる以下の試薬が混合した溶液です。
  • PMA ( Phorbol 12-Myristate 13-Acetate )
  • Ionomycin ( calcium ionophore )
  • BD GolgiPlugTM ,containing brefeldin A ( protein transport inhibitor ) 
2. HiCK-1 Cytokine Positive Control Cells    ・・・ 1 vial

陽性コントロール用の細胞です。
IL-2/IFN-γ/TNF-α の発現をフローサイトメトリー解析により確認されたパラホルムアルデヒド固定された細胞です。
3. BD Biosciences PharmingenStain Buffer ( FBS )    ・・・ 1 vial, 25 mL

細胞洗浄用バッファーです。
2% fetal bovine serum と0.09% sodium azide を含有しています。
4. BD Cytofix/Cytoperm Buffer  【劇物】 ・・・ 1 vial, 25 mL

細胞固定と細胞膜透過を1ステップで処理可能な試薬。
5. BD Perm/Wash Buffer ・・・ 1 vial, 25 mL

細胞の洗浄と細胞膜透過の保持を行う試薬。
6. PE-Conjugated monoclonal antibody ・・・ 1 vial (25 tests)
  • anti-human IL-2 antibody (clone MQ1-17H12)
  • anti-human IFN-γ antibody (clone B27)
  • anti-human TNF-α antibody (clone MAb11) 
7. PE conjugated Isotype Control Cocktail ・・・ 1 vial (25 tests)

抗体の非特異的な結合によるバックグラウンドの確認に使用します。
8. Purified Blocking Antibody Cocktail    ・・・ 1 vial (15 tests)

特に、細胞内における抗体の非特異的な結合によるバックグラウンドの確認に使用します。



Mouse Intracelluar Cytokine Staining Starter Kit

Cat.No Description SIZE 希望
小売価格
データ
シート
MSDS
559311 Mouse Intracellular Cytokine Staining Stater Kit 25 tests \110,000 pdf pdf

キットの内容

1. Leukocyte Activation Cocktail ・・・ 2 vials, 各 100 μL

細胞刺激に用いる以下の試薬が混合した溶液です。
  • PMA ( Phorbol 12-Myristate 13-Acetate )
  • Ionomycin ( calcium ionophore )
  • BD GolgiPlugTM ,containing brefeldin A ( protein transport inhibitor )
2. MiCK-1 Cytokine Positive Control Cells ・・・ 1 vial

陽性コントロール用の細胞です。
IL-2/IFN-γ/TNF-α の発現をフローサイトメトリー解析により確認されたパラホルムアルデヒド固定された細胞です。
3. BD Biosciences PharmingenStain Buffer ( FBS ) ・・・ 1 vial, 25 mL

細胞洗浄用バッファーです。2% fetal bovine serum と0.09% sodium azide を含有しています。
4. BD Cytofix/Cytoperm Buffer 【劇物】 ・・・ 1 vial, 25 mL

細胞固定と細胞膜透過を1ステップで処理可能な試薬。
5. BD Perm/Wash Buffer ・・・ 1 vial, 25 mL

細胞の洗浄と細胞膜透過の保持を行う試薬。
6. PE-Conjugated monoclonal antibody ・・・ 各 1 vial (25 tests)
  • anti-mouse IL-2 antibody (clone JES6-5H4)
  • anti-mouse IFN-γ antibody (clone XMG1.2)
  • anti-mouseTNF-α antibody (clone MP6-XT22)
7. PE conjugated Isotype Control Cocktail ・・・ 1 vial (25 tests)

抗体の非特異的な結合によるバックグラウンドの確認に使用します。
8. Purified Blocking Antibody Cocktail ・・・ 1 vial (15 tests)

特に、細胞内における抗体の非特異的な結合によるバックグラウンドの確認に使用します。



測定手順の概略 ( Human Mouse 共通 )

  1. Stimulate and Harvest Cells (細胞の刺激と培養)

    • Leukocyte Activation Cocktail ・・・ ( 2 vials )
    • PharmingenStain Buffer (FBS) ・・・ ( 1 vial )
    • Protocol for Cell Seperation & Stimulation


  2. Fix and Permeabilize Cells (細胞の固定と膜透過処理)

    • BD Cytofix/Cytoperm ・・・ ( 1 vial)
    • BD Perm/Wash Buffer ・・・ ( 1 vial)


  3. Stain Intracellular Cytokines (細胞内サイトカイン染色)

    • PE Anti-IL-2 ・・・ (25 Tests)
    • PE Anti-IFN-γ ・・・ (25 Tests)
    • PE Anti-TNF-α ・・・ (25 Tests)


  4. Intracellular Staining Controls

    • HiCK or MiCK Positive Control Cells ・・・ (1 vial)
    • Purified Blocking Antibody Cocktail ・・・ (15 Tests)
    • PE Isotype Control Cocktail ・・・ (25 Tests)



    フローサイトメーター解析 (例)

    Human Intracelluar Cytokine Staining Starter Kit


    ヒト PBMCs を PMA & Ionomycin で4時間刺激後の細胞内サイトカイン染色例


    Mouse Intracelluar Cytokine Staining Starter Kit


    BALB/c マウス脾細胞を PMA & Ionomycin で4時間刺激後の細胞内サイトカイン染色例